研究2 - 8の° Cの貯蔵のためのラットのGhrelin Elisaのキット3のサンドイッチのカスタム化

研究のためのラットのGalectin 3のサンドイッチELISAのキット96 WellsによってカスタマイズされるGAL-3 ELISAのキット

Cat.No Eの1533のRA

標準的なカーブの範囲:0.05ng/ml - 20ng/ml

感受性:0.023ng/ml

サイズ:96の井戸

精密

内部試金の精密（試金内の精密）は1つの版で知られていた集中の3つのサンプル内部試金の精密を査定するためにテストされました。

相互試金の精密（試金間の精密）は別の試金で知られていた集中の3つのサンプル相互試金の精密を査定するためにテストされました。

CV （%） = SD/mean X 100

内部試金:CV<8>

相互試金:CV<10>

意図されていた使用

このサンドイッチ キットは血清、血しょう、細胞培養のsupernates、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートのラットGalectin 3 （別名GAL-3）の正確で量的な検出のためです。

注意

• 使用前に、キットおよびサンプルは室温に30分自然に暖められるべきです。
• この指示は実験で厳しく続かれなければなりません。ストリップの望ましい数が取除かれたら、すぐに悪化から残を保護するために袋を封じ直して下さい。使用中場合のすべての試薬を覆って下さい。
• 試薬をピペットで移した場合付加の順序そして率を十分によからのピペットで移すMake sure。
• ピペットはひっくり返、手元の版のシーラーはクロス汚染を避けるためにきれい、使い捨て可能なべきです。
• 異なったバッチからの試薬を一緒に使用することを避けて下さい。
• 基質の解決Bは長い間つくためにライトに敏感、露出しません基質の解決Bをです。
• 解決を含んでいます酸を停止して下さい。この材料を使用した場合目、手および皮保護を身に着けて下さい。キットの試薬が付いている皮または粘膜の接触を避けて下さい。
• キットは有効期限を越えて使用されるべきではないです。

試薬の準備

すべての試薬は使用の前の室温に持って来られるべきです。

標準は12ng/ml標準貯蔵液を発生させるために標準的な希釈剤の120μlの標準（24ng/ml）の120μlを再構成します。標準が希薄を作る前に穏やかな撹拌の15分の間坐るようにして下さい。6ng/ml、3ng/ml、1.5ng/mlおよび0.75ng/ml解決を作り出すために連続的に標準的な希釈剤と標準貯蔵液（12ng/ml）の1:2を薄くすることによって重複した標準的なポイントを準備して下さい。標準的な希釈剤はゼロ標準（0 ng/ml）として役立ちます。どの残りの解決でも-20°Cで凍り、1か月以内に使用されるべきです。提案される標準ソリューションの希薄は次の通りあります:

洗浄緩衝1x洗浄緩衝の500のmlをもたらすために脱イオンされるへの洗浄緩衝濃縮物30xの希薄な20mlまたは蒸留水。水晶が濃縮物で形作ったら、水晶が完全に分解したまで穏やかの組合せ。

試金プロシージャ

1. 指示されるようにすべての試薬、標準ソリューションおよびサンプルを準備して下さい。使用の前に室温にすべての試薬を持って来て下さい。試金は室温で行われます。

2. 試金に必要なストリップの数を定めて下さい。使用のためのフレームでストリップを挿入して下さい。未使用のストリップは2-8°C.で貯えられるべきです。

3. 標準に50μl標準をよく加えて下さい。注:標準ソリューションがbiotinylated抗体を含んでいるので標準に抗体をよく加えないで下さい。

4. 次に40μlサンプルをサンプル井戸に加え、サンプル井戸に10μl反GAL 3の抗体を加え、そしてサンプル井戸および標準的な井戸（ない空白制御井戸）に50μl streptavidin-HRPを加えて下さい。よく混合して下さい。シーラーで版を覆って下さい。37°C.で60分を孵化させて下さい。

5. シーラーを取除き、5回版を洗浄緩衝との洗浄して下さい。30秒から各ワシントン州の1分の少なくとも0.35 mlの洗浄緩衝に井戸を浸して下さい。自動化された洗浄のために、すべての井戸を吸い出し、入り過ぎる洗浄緩衝との5回を湧き出ます洗浄緩衝と洗浄して下さい。ペーパー タオルまたは他の吸収性材料に版にしみを付けて下さい。

6. 50μl基質の解決Aをそれぞれに井戸加え、次にそれぞれに50μl基質の解決Bをよく加えて下さい。暗闇の37°Cで10分の新しいシーラーで覆われる版を孵化させて下さい。

7. 50μlをよく停止しますそれぞれに解決を、青い色すぐに変わります黄色に加えて下さい。

8. 停止解決を加えた後10のメヌエットの内の450 nmにmicroplateの読者セットを使用してそれぞれの光学濃度（ODの価値）をすぐに井戸定めて下さい。

結果の計算

標準的なカーブを横の（x）軸線の集中に対して縦の（y）軸線で標準それぞれのための平均ODの計画によって組み立て、グラフのポイントを通した最もよい適合のカーブを引いて下さい。これらの計算はコンピュータ ベースのカーブ付属品ソフトウェアと最もよく行い、最もよい適合ラインは回帰分析によって定めることができます。

Referances

「免疫があ仲介しましたベータ細胞の破壊の生体外および内部のヴィヴォ- galectin-3のための極めて重要な役割--を」。
Karlsen A.E.、Storling Z.M.、Sparre T.、ラーセンM.R.、Mahmood A.、Storling J.、Roepstorff P.、Wrzesinski K.、ラーセンP.M.、異様なS.、ニールセンK.、Heding P.、Ricordi C.、Johannesen J.、Kristiansen O.P.、Christensen U.B.、Kockum I.、Luthman H.、Nerup J.、Pociot F。
Biochem.Biophys。Res.Commun。344:406- 415(2006)