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7 年
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96カスタマイズされる健康な版のマウスのRetn ELISAのキットのマウスのResistinサンドイッチELISAキット
Cat.No E0263Mo
標準的なカーブの範囲:0.3ng/ml - 90ng/ml
感受性:0.13ng/ml
サイズ:96の井戸
*Thisプロダクトは研究の使用だけのために、ない診断のプロシージャの使用のためです。それは非常に使用の前にこの指示を完全に読むことを推薦しますあります。
意図されていた使用
このサンドイッチ キットは血清、血しょう、細胞培養のsupernates、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートのマウスNesfatin1 （別名Retn）の正確で量的な検出のためです。
試金の主義
このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）です。版はマウスのRetnの抗体とプリコートされました。Retnはサンプルで加えられ、井戸で塗られる抗体に結合します示します。そしてマウスのRetnのbiotinylated抗体は加えられ、サンプルのRetnに結合します。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated Retnの抗体に結合します。孵化の後で解かれたStreptavidin-HRPは洗浄のステップの間に洗い流されます。基質の解決はそれから加えられ、色はマウスRetnの量に比例して成長します。反作用は酸性の付加で停止します解決を終わり、吸光度は450 nmで測定されます。
注意
標本コレクション
血清は血清が室温で10-20分の間凝固するようにします。20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。
血しょうは抗凝固薬としてエチレンジアミン四酢酸かヘパリンを使用して血しょうを集めます。2時で2000-3000のRPMで15分のためのサンプルを-コレクションの30分以内の8°C遠心分離機にかけて下さい。
尿は生殖不能の管によって集まります。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。pleuroperitoneal流動および脳脊髄液を集めた場合、前述のプロシージャに続いて下さい。
細胞培養の上澄みは生殖不能の管によって検査するとき部品を分泌しなさい集まります。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。supernatantsを注意深く集めて下さい。細胞内の部品を検査した場合、およそ1 million/mlの細胞の集中に細胞の懸濁液を薄くするのにPBS （pH 7.2-7.4）を使用して下さい。中の部品を放つために繰り返された氷結雪解け周期を通して細胞を損なって下さい。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。
ティッシュは他の体液余分な血を完全に取除き、均質化の前に重量を量るためにPBS （pH 7.4）のティッシュを洗います。ティッシュを細かく切り刻に、氷のガラス ホモジェナイザーとのPBS （pH7.4）の均質にして下さい。2-8°Cで分解するか、または-20°C.の遠心分離機でおよそ20分の2000-3000のRPMで凍らせて下さい。
試薬の準備
すべての試薬は使用の前の室温に持って来られるべきです。
標準は48ng/ml標準貯蔵液を発生させるために標準的な希釈剤の120μlの標準（96ng/ml）の120μlを再構成します。標準が希薄を作る前に穏やかな撹拌の15分の間坐るようにして下さい。24ng/ml、12ng/ml、6ng/mlおよび3ng/ml解決を作り出すために連続的に標準的な希釈剤と標準貯蔵液（48ng/ml）の1:2を薄くすることによって重複した標準的なポイントを準備して下さい。標準的な希釈剤はゼロ標準（0 ng/ml）として役立ちます。どの残りの解決でも-20℃で凍り、1か月以内に使用されるべきです。提案される標準ソリューションの希薄は次の通りあります:
| 48ng/ml | 標準的なNo.5 | 120μl元の標準+ 120μl標準の希釈剤 |
| 24ng/ml | 標準的なNo.4 | 標準120μl No.5 + 120μl標準の希釈剤 |
| 12ng/ml | 標準的なNo.3 | 標準120μl No.4 + 120μl標準の希釈剤 |
| 6ng/ml | 標準的なNo.2 | 標準120μl No.3 + 120μl標準の希釈剤 |
| 3ng/ml | 標準的なNo.1 | 標準120μl No.2 + 120μl標準の希釈剤 |
| 標準的な集中 | 標準的なNo.5 | 標準的なNo.4 | 標準的なNo.3 | 標準的なNo.2 | 標準的なNo.1 |
| 96ng/ml | 48ng/ml | 24ng/ml | 12ng/ml | 6ng/ml | 3ng/ml |
洗浄緩衝1x洗浄緩衝の500のmlをもたらすために脱イオンされるへの洗浄緩衝濃縮物30xの希薄な20mlまたは蒸留水。水晶が濃縮物で形作ったら、水晶が完全に分解したまで穏やかの組合せ。
試金プロシージャ
1. 指示されるようにすべての試薬、標準ソリューションおよびサンプルを準備して下さい。使用の前に室温にすべての試薬を持って来て下さい。試金は室温で行われます。
2. 試金に必要なストリップの数を定めて下さい。使用のためのフレームでストリップを挿入して下さい。未使用のストリップは2-8°C.で貯えられるべきです。
3. 標準に50μl標準をよく加えて下さい。注:標準ソリューションがbiotinylated抗体を含んでいるので標準に抗体をよく加えないで下さい。
4. 次に40μlサンプルをサンプル井戸に加え、サンプル井戸に10μl反Retn抗体を加え、そしてサンプル井戸および標準的な井戸（ない空白制御井戸）に50μl streptavidin-HRPを加えて下さい。よく混合して下さい。シーラーで版を覆って下さい。37°C.で60分を孵化させて下さい。
5. シーラーを取除き、5回版を洗浄緩衝との洗浄して下さい。30秒から各ワシントン州の1分の少なくとも0.35 mlの洗浄緩衝に井戸を浸して下さい。自動化された洗浄のために、すべての井戸を吸い出し、入り過ぎる洗浄緩衝との5回を湧き出ます洗浄緩衝と洗浄して下さい。ペーパー タオルまたは他の吸収性材料に版にしみを付けて下さい。
6. 50μl基質の解決Aをそれぞれに井戸加え、次にそれぞれに50μl基質の解決Bをよく加えて下さい。暗闇の37°Cで10分の新しいシーラーで覆われる版を孵化させて下さい。
7. 50μlをよく停止しますそれぞれに解決を、青い色すぐに変わります黄色に加えて下さい。
8. 停止解決を加えた後10のメヌエットの内の450 nmにmicroplateの読者セットを使用してそれぞれの光学濃度（ODの価値）をすぐに井戸定めて下さい。
Referances
「泌乳のマウスの白い脂肪組織のResistinそしてRELMアルファの遺伝子発現」。
ビングC.、ゴーメッツAmbrosi J.、Zabalegui N.、ウィリアムスG.、Trayhurn P。
Biochem.Biophys。Res.Commun。296:458- 462(2002)