マウスFGF 2の抗体が付いている感受性のマウスの繊維芽細胞の成長因子2 エリザのキット

感受性および特定性のマウスの繊維芽細胞の成長因子2 エリザのキット96の井戸

Cat.No E1592Mo

標準的なカーブの範囲:3ng/L - 900ng/L

感受性:0.14ng/L

サイズ:96の井戸

貯蔵:終わる6ヶ月の貯蔵のための2-8°C.で試薬を参照します有効期限を保ちます-20°C.のAvoidによって繰り返される雪解け周期でそれを貯えて下さい。個々の試薬が開けばキットが1か月以内に使用されることが推薦されます。

*このプロダクトは研究の使用だけのために、ない診断のプロシージャの使用のためです。それは非常に使用の前にこの指示を完全に読むことを推薦しますあります。

意図されていた使用

このサンドイッチ キットは血清、血しょう、細胞培養の上層部、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートのマウスの繊維芽細胞の成長因子2 （別名FGF-2）の正確で量的な検出のためです。

試金の主義

このキットは酵素つながれた免疫吸着剤の試金（エリザ）です。版はマウスFGF-2の抗体とプリコートされました。FGF-2はサンプルで加えられ、井戸で塗られる抗体に結合します示します。そしてbiotinylatedマウスFGF-2の抗体は加えられ、サンプルのFGF-2に結合します。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated FGF-2の抗体に結合します。孵化の後で解かれたStreptavidin-HRPは洗浄のステップの間に洗い流されます。基質の解決はそれから加えられ、色はマウスFGF-2の量に比例して成長します。反作用は酸性の付加で停止します解決を終わり、吸光度は450 nmで測定されます。

標本コレクション

血清は血清が室温で10-20分の間凝固するようにします。20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。

血しょうは抗凝固薬としてエチレンジアミン四酢酸かヘパリンを使用して血しょうを集めます。2時で2000-3000のRPMで15分のためのサンプルを-コレクションの30分以内の8°C遠心分離機にかけて下さい。

尿は生殖不能の管によって集まります。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。pleuroperitoneal流動および脳脊髄液を集めた場合、前述のプロシージャに続いて下さい。

細胞培養の上澄みは生殖不能の管によって検査するとき部品を分泌しなさい集まります。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。supernatantsを注意深く集めて下さい。細胞内の部品を検査した場合、およそ1 million/mlの細胞の集中に細胞の懸濁液を薄くするのにPBS （pH 7.2-7.4）を使用して下さい。中の部品を放つために繰り返された氷結雪解け周期を通して細胞を損なって下さい。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。

余分な血を完全に取除き、均質化の前に重量を量るべきPBS （pH 7.4）のティッシュの洗浄のティッシュ。ティッシュを細かく切り刻に、氷のガラス ホモジェナイザーとのPBS （pH7.4）の均質にして下さい。2-8°Cで分解するか、または-20°C.の遠心分離機でおよそ20分の2000-3000のRPMで凍らせて下さい。

注意して下さい

• サンプル集中は試金で使用される前に予測されるべきです。サンプル集中が標準的なカーブの範囲の内になければ、ユーザーは彼らの特定の実験のための最適のサンプルを定めるために私達に連絡しなければなりません。
• 5日以内に使用されるべきサンプルは2-8°C.サンプルでaliquotedべきまたは1か月以内の-20°Cか6か月以内の-80°Cで貯えられなければなりません貯えられるべきです。avoid氷結の雪解け周期を繰り返しました。
• サンプルは試金を始める前の室温に持って来られるべきです。
• 使用の前にサンプルを集める遠心分離機。
• NaN3を含んでいるサンプルはホース ラディッシュの過酸化酵素(HRP)の活動を禁じると同時にテストすることができません。
• supernatantsを注意深く集めて下さい。沈殿物が貯蔵の間に起こったときに、遠心分離は再度行われるべきです。
• 溶血は試験結果の妥当性に非常に影響を与えることができます。溶血を最小にするために心配を取って下さい。

*Sampleはこのキットと薄くすることができません。キットを準備するのに材料のために私達は使用しますサンプル マトリックス干渉は不当に試金の特定性そして正確さを弱めるかもしれません。

試金プロシージャ

1. 指示されるようにすべての試薬、標準ソリューションおよびサンプルを準備して下さい。使用の前に室温にすべての試薬を持って来て下さい。試金は室温で行われます。

2. 試金に必要なストリップの数を定めて下さい。使用のためのフレームでストリップを挿入して下さい。未使用のストリップは2-8°C.で貯えられるべきです。

3. 標準に50μl標準をよく加えて下さい。注:標準ソリューションがbiotinylated抗体を含んでいるので標準に抗体をよく加えないで下さい。

4. 次に40μlサンプルをサンプル井戸に加え、サンプル井戸に10μl反FGF 2抗体を加え、そしてサンプル井戸および標準的な井戸（ない空白制御井戸）に50μl streptavidin-HRPを加えて下さい。よく混合して下さい。シーラーで版を覆って下さい。37°C.で60分を孵化させて下さい。

5. シーラーを取除き、5回版を洗浄緩衝との洗浄して下さい。30秒から各ワシントン州の1分の少なくとも0.35 mlの洗浄緩衝に井戸を浸して下さい。自動化された洗浄のために、すべての井戸を吸い出し、入り過ぎる洗浄緩衝との5回を湧き出ます洗浄緩衝と洗浄して下さい。ペーパー タオルまたは他の吸収性材料に版にしみを付けて下さい。

6. 50μl基質の解決Aをそれぞれに井戸加え、次にそれぞれに50μl基質の解決Bをよく加えて下さい。暗闇の37°Cで10分の新しいシーラーで覆われる版を孵化させて下さい。

7. 50μlをよく停止しますそれぞれに解決を、青い色すぐに変わります黄色に加えて下さい。

8. 停止解決を加えた後10のメヌエットの内の450 nmにmicroplateの読者セットを使用してそれぞれの光学濃度（ODの価値）をすぐに井戸定めて下さい。

結果の計算

標準的なカーブを横の（x）軸線の集中に対して縦の（y）軸線で標準それぞれのための平均ODの計画によって組み立て、グラフのポイントを通した最もよい適合のカーブを引いて下さい。これらの計算はコンピュータ ベースのカーブ付属品ソフトウェアと最もよく行い、最もよい適合ラインは回帰分析によって定めることができます。

参照

Yamada H.、Yamada E.、Kwak N.、Ando A.、Suzuki A.、Esumi N.、Zack D.J.、カンポキアーロP.A。
J. Cell。Physiol。185:135- 142(2000)