時間2時間のの成長の微分の要因5ラットELISAのキットの高い感受性試金の

時間2時間のの高精度および感受性のラットの成長の微分の要因5 ELISAキット試金の

Cat.No E1638Ra

標準的なカーブの範囲:10ng/L - 2000ng/L

感受性:5.06ng/L

サイズ:96の井戸

貯蔵:2-8°C.で試薬を貯えなさい。6ヶ月の貯蔵のために-20°C.でそれを保つために有効期限を参照しなさい。Avoid雪解け周期を繰り返した。個々の試薬が開けばキットが1か月以内に使用されることが推薦される。

*Thisプロダクトは研究の使用だけのために、ない診断のプロシージャの使用のためである。それは非常に使用の前にこの指示を完全に読むことを推薦するある。

意図されていた使用

このサンドイッチ キットは血清、血しょう、細胞培養のsupernates、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートのラットの成長の微分の要因5 （別名GDF5）の正確で量的な検出のためである。

試金の主義

このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）である。版はラットGDF5の抗体とプリコートされた。サンプルのGDF5現在は加えられ、抗体への縛りは井戸で塗られる。そしてbiotinylatedラットGDF5の抗体はサンプルのGDF5に縛り加えられ。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated GDF5の抗体に結合する。孵化によって解かれるStreptavidin-HRPが洗浄のステップの間に洗い流された後。基質の解決はそれから加えられ、色はラットGDF5の量に比例して成長する。反作用は酸性の付加で停止する解決を終わり、吸光度は450 nmで測定される。

注意

• 使用前に、キットおよびサンプルは室温に30分自然に暖められるべきである。
• この指示は実験で厳しく続かれなければならない。
• ストリップの望ましい数が取除かれたら、すぐに悪化から残るために保護するように袋を封じ直しなさい。使用中場合のすべての試薬を覆いなさい。
• いつ試薬をピペットで移すこと十分によからの付加の順序そして率をピペットで移すMake sure。
• 手元のピペットの先端そして版のシーラーはクロス汚染を避けるためにきれい、使い捨て可能なべきである。
• 異なったバッチからの試薬を一緒に使用することを避けなさい。
• 基質の解決Bは長い間つくためにライトに敏感、露出しない基質の解決Bをである。
• 解決を含んでいる酸を停止しなさい。この材料を使用した場合目、手および皮保護を身に着けなさい。キットの試薬が付いている皮または粘膜の接触を避けなさい。
• キットは有効期限を越えて使用されるべきではない。

試薬の準備

すべての試薬は使用の前の室温に持って来られるべきである。

標準は標準の120μlを再構成する（2400ng/L） 1200ng/L標準貯蔵液を発生させる標準的な希釈剤の120μlと。標準が希薄を作る前に穏やかな撹拌の15分の間坐るようにしなさい。連続的に標準貯蔵液を薄くすることによって重複した標準的なポイントを準備しなさい（1200ng/L） 600ng/L、300ng/L、150ng/Lおよび75ng/L解決を作り出す標準的な希釈剤との1:2。ゼロの標準（0 ng/L）として標準的な希釈剤のサーブ。どの残りの解決でも-20°Cで凍り、1か月以内に使用されるべきである。提案される標準ソリューションの希薄は次の通りある:

洗浄緩衝1x洗浄緩衝の500のmlをもたらすために脱イオンされるへの洗浄緩衝濃縮物30xの希薄な20mlまたは蒸留水。水晶が濃縮物で形作ったら、水晶が完全に分解したまで穏やかの組合せ。

試金プロシージャ

1. 指示されるようにすべての試薬、標準ソリューションおよびサンプルを準備しなさい。使用の前に室温にすべての試薬を持って来なさい。試金は室温で行われる。

2. 試金に必要なストリップの数を定めなさい。使用のためのフレームでストリップを挿入しなさい。未使用のストリップは2-8°C.で貯えられるべきである。

3. 標準に50μl標準をよく加えなさい。注:標準ソリューションがbiotinylated抗体を含んでいるので標準に抗体をよく加えてはいけない。

4. 40μlサンプルをサンプル井戸に井戸を見本抽出するためにそれから10μl反GDF5抗体を加えるために加え、そしてサンプル井戸および標準的な井戸（よのない空白制御）に50μl streptavidin-HRPを加えなさい。よく混合しなさい。シーラーで版を覆いなさい。37°C.で60分を孵化させなさい。

5. シーラーを取除き、5回版を洗浄緩衝との洗浄しなさい。30秒から各ワシントン州の1分の少なくとも0.35 mlの洗浄緩衝に井戸を浸しなさい。自動化された洗浄のために、すべての井戸を吸い出し、洗浄緩衝が付いている井戸を入れ過ぎる洗浄緩衝との5回を洗浄しなさい。ペーパー タオルまたは他の吸収性材料に版にしみを付けなさい。

6. 50μl基質の解決Aを各井戸に加え、次に各井戸に50μl基質の解決Bを加えなさい。暗闇の37°Cで10分の新しいシーラーで覆われる版を孵化させなさい。

7. 50μlを停止する各井戸に解決を、青い色すぐに変わる黄色に加えなさい。

8. 停止解決を加えた後10のメヌエットの内の450 nmにmicroplateの読者セットを使用してすぐによくそれぞれの光学濃度（ODの価値）を定めなさい。

Referances

「萌芽期のラットのmidbrainのdopaminergicニューロンの存続そして形態に対する成長/微分の要因5の効果生体外で」。
O'Keeffe G.W.、Dockery P.、サリバンAM。
J. Neurocytol。33:479- 488(2004)