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8 年
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カスタマイズされたラットの繊維芽細胞の成長の要因23 ELISAキットの高精度FGF-23 ELISAのキット
Cat.No E0170Ra
標準的なカーブの範囲:5pg/ml - 1500pg/ml
感受性:2.56pg/ml
試金の主義
このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）である。版はラットFGF-23の抗体とプリコートされた。サンプルのFGF-23現在は加えられ、抗体への縛りは井戸で塗られる。そしてbiotinylatedラットFGF-23の抗体はサンプルのFGF-23に縛り加えられ。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated FGF-23の抗体に結合する。孵化によって解かれるStreptavidin-HRPが洗浄のステップの間に洗い流された後。基質の解決はそれから加えられ、色はラットFGF-23の量に比例して成長する。反作用は酸性の付加で停止する解決を終わり、吸光度は450 nmで測定される。
提供される試薬
| 部品 | 量 |
| 標準ソリューション（1600pg/ml） | 0.5ml x1 |
| プリコートされたELISAの版 | 12 * 8つの健康なストリップx1 |
| 標準的な希釈剤 | 3ml x1 |
| Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
| 解決を停止しなさい | 6ml x1 |
| 基質の解決A | 6ml x1 |
| 基質の解決B | 6ml x1 |
| 洗浄緩衝濃縮物（30x） | 20ml x1 |
| BiotinylatedのラットFGF-23の抗体 | 1ml x1 |
| ユーザーの指示 | 1 |
| 版のシーラー | 2 pics |
| ジッパー袋 | 1つのpic |
試薬の準備
すべての試薬は使用の前の室温に持って来られるべきである。
標準は800pg/ml標準貯蔵液を発生させるために標準的な希釈剤の120μlの標準（1600pg/ml）の120μlを再構成する。標準が希薄を作る前に穏やかな撹拌の15分の間坐るようにしなさい。400pg/ml、200pg/ml、100pg/mlおよび50pg/ml解決を作り出すために連続的に標準的な希釈剤と標準貯蔵液（800pg/ml）の1:2を薄くすることによって重複した標準的なポイントを準備しなさい。ゼロの標準（0 pg/ml）として標準的な希釈剤のサーブ。どの残りの解決でも-20°Cで凍り、1か月以内に使用されるべきである。提案される標準ソリューションの希薄は次の通りある:
| 800pg/ml | 標準的なNo.5 | 120μl元の標準+ 120μl標準的な希釈剤 |
| 400pg/ml | 標準的なNo.4 | 標準120μl No.5 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 200pg/ml | 標準的なNo.3 | 標準120μl No.4 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 100pg/ml | 標準的なNo.2 | 標準120μl No.3 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 50pg/ml | 標準的なNo.1 | 標準120μl No.2 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 標準的な集中 | 標準的なNo.5 | 標準的なNo.4 | 標準的なNo.3 | 標準的なNo.2 | 標準的なNo.1 |
| 1600pg/ml | 800pg/ml | 400pg/ml | 200pg/ml | 100pg/ml | 50pg/ml |
洗浄緩衝1x洗浄緩衝の500のmlをもたらすために脱イオンされるへの洗浄緩衝濃縮物30xの希薄な20mlまたは蒸留水。水晶が濃縮物で形作ったら、水晶が完全に分解したまで穏やかの組合せ。
試金プロシージャ
1. 指示されるようにすべての試薬、標準ソリューションおよびサンプルを準備しなさい。使用の前に室温にすべての試薬を持って来なさい。試金は室温で行われる。
2. 試金に必要なストリップの数を定めなさい。使用のためのフレームでストリップを挿入しなさい。未使用のストリップは2-8°C.で貯えられるべきである。
3. 標準に50μl標準をよく加えなさい。注:標準ソリューションがbiotinylated抗体を含んでいるので標準に抗体をよく加えてはいけない。
4. 40μlサンプルをサンプル井戸に井戸を見本抽出するためにそれから10μl反FGF 23抗体を加えるために加え、そしてサンプル井戸および標準的な井戸（よのない空白制御）に50μl streptavidin-HRPを加えなさい。よく混合しなさい。シーラーで版を覆いなさい。37°C.で60分を孵化させなさい。
5. シーラーを取除き、5回版を洗浄緩衝との洗浄しなさい。30秒から各ワシントン州の1分の少なくとも0.35 mlの洗浄緩衝に井戸を浸しなさい。自動化された洗浄のために、すべての井戸を吸い出し、洗浄緩衝が付いている井戸を入れ過ぎる洗浄緩衝との5回を洗浄しなさい。ペーパー タオルまたは他の吸収性材料に版にしみを付けなさい。
6. 50μl基質の解決Aを各井戸に加え、次に各井戸に50μl基質の解決Bを加えなさい。暗闇の37°Cで10分の新しいシーラーで覆われる版を孵化させなさい。
7. 50μlを停止する各井戸に解決を、青い色すぐに変わる黄色に加えなさい。
8. 停止解決を加えた後10のメヌエットの内の450 nmにmicroplateの読者セットを使用してすぐによくそれぞれの光学濃度（ODの価値）を定めなさい。
結果の計算
横の（x）軸線の集中に対して縦の（y）軸線の各標準のための平均ODの計画によって標準的なカーブをグラフのポイントを通した最もよく適当なカーブを引くために組み立てれば。これらの計算はコンピュータ ベースのカーブ付属品ソフトウェアと最もよく行い、最もよく適当なラインは回帰分析によって定めることができる。
Referances
「IGF-IおよびIGFBP-3の循環のLP誘発の減少に於いての役割およびレバーの遺伝子発現を」しない。
プリエゴT.、イバニェスde Caceres I.、マーティンA.I.、Villanua M.A.、ローペッツCalderon A。
AM.J. Physiol。Endocrinol。Metab。286:E50- 6(2004)