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7 年
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高精度のラットの骨Morphogenetic蛋白質4 ELISAのキットはBMP4 ELISAのキットをカスタマイズした
Cat.No E0266Ra
サイズ:96の井戸
貯蔵:2-8°C.で試薬を貯えなさい。6ヶ月の貯蔵のために-20°C.でそれを保つために有効期限を参照しなさい。Avoid雪解け周期を繰り返した。個々の試薬が開けばキットが1か月以内に使用されることが推薦される。
*Thisプロダクトは研究の使用だけのために、ない診断のプロシージャの使用のためである。それは非常に使用の前にこの指示を完全に読むことを推薦するある。
意図されていた使用
このサンドイッチ キットは血清、血しょう、細胞培養のsupernates、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートのラットの骨のMorphogenetic蛋白質4 （別名BMP-4）の正確で量的な検出のためである。
試金の主義
このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）である。版はラットBMP-4の抗体とプリコートされた。サンプルのBMP-4現在は加えられ、抗体への縛りは井戸で塗られる。そしてbiotinylatedラットBMP-4の抗体はサンプルのBMP-4に縛り加えられ。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated BMP-4の抗体に結合する。孵化によって解かれるStreptavidin-HRPが洗浄のステップの間に洗い流された後。基質の解決はそれから加えられ、色はラットBMP-4の量に比例して成長する。反作用は酸性の付加で停止する解決を終わり、吸光度は450 nmで測定される。
注意
試薬の準備
すべての試薬は使用の前の室温に持って来られるべきである。
標準は標準の120μlを再構成する（640ng/L） 320ng/L標準貯蔵液を発生させる標準的な希釈剤の120μlと。標準が希薄を作る前に穏やかな撹拌の15分の間坐るようにしなさい。連続的に標準貯蔵液を薄くすることによって重複した標準的なポイントを準備しなさい（320ng/L） 160ng/L、80ng/L、40ng/Lおよび20ng/L解決を作り出す標準的な希釈剤との1:2。ゼロの標準（0 ng/L）として標準的な希釈剤のサーブ。どの残りの解決でも-20°Cで凍り、1か月以内に使用されるべきである。提案される標準ソリューションの希薄は次の通りある:
| 320ng/L | 標準的なNo.5 | 120μl元の標準+ 120μl標準的な希釈剤 |
| 160ng/L | 標準的なNo.4 | 標準120μl No.5 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 80ng/L | 標準的なNo.3 | 標準120μl No.4 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 40ng/L | 標準的なNo.2 | 標準120μl No.3 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 20ng/L | 標準的なNo.1 | 標準120μl No.2 + 120μl標準的な希釈剤 |
| 標準的な集中 | 標準的なNo.5 | 標準的なNo.4 | 標準的なNo.3 | 標準的なNo.2 | 標準的なNo.1 |
| 640ng/L | 320ng/L | 160ng/L | 80ng/L | 40ng/L | 20ng/L |
洗浄緩衝1x洗浄緩衝の500のmlをもたらすために脱イオンされるへの洗浄緩衝濃縮物30xの希薄な20mlまたは蒸留水。水晶が濃縮物で形作ったら、水晶が完全に分解したまで穏やかの組合せ。
試金プロシージャ
1. 指示されるようにすべての試薬、標準ソリューションおよびサンプルを準備しなさい。使用の前に室温にすべての試薬を持って来なさい。試金は室温で行われる。
2. 試金に必要なストリップの数を定めなさい。使用のためのフレームでストリップを挿入しなさい。未使用のストリップは2-8°C.で貯えられるべきである。
3. 標準に50μl標準をよく加えなさい。注:標準ソリューションがbiotinylated抗体を含んでいるので標準に抗体をよく加えてはいけない。
4. 井戸を見本抽出するために40μlサンプルを加え、次にサンプル井戸に10μl反BMP 4の抗体を加えなさい、次にサンプル井戸および標準的な井戸（よのない空白制御）に50μl streptavidin-HRPを加えなさい。よく混合しなさい。シーラーで版を覆いなさい。37°C.で60分を孵化させなさい。
5. シーラーを取除き、5回版を洗浄緩衝との洗浄しなさい。30秒から各ワシントン州の1分の少なくとも0.35 mlの洗浄緩衝に井戸を浸しなさい。自動化された洗浄のために、すべての井戸を吸い出し、洗浄緩衝が付いている井戸を入れ過ぎる洗浄緩衝との5回を洗浄しなさい。ペーパー タオルまたは他の吸収性材料に版にしみを付けなさい。
6. 50μl基質の解決Aを各井戸に加え、次に各井戸に50μl基質の解決Bを加えなさい。暗闇の37°Cで10分の新しいシーラーで覆われる版を孵化させなさい。
7. 50μlを停止する各井戸に解決を、青い色すぐに変わる黄色に加えなさい。
8. 停止解決を加えた後10のメヌエットの内の450 nmにmicroplateの読者セットを使用してすぐによくそれぞれの光学濃度（ODの価値）を定めなさい。
結果の計算
横の（x）軸線の集中に対して縦の（y）軸線の各標準のための平均ODの計画によって標準的なカーブをグラフのポイントを通した最もよく適当なカーブを引くために組み立てれば。これらの計算はコンピュータ ベースのカーブ付属品ソフトウェアと最もよく行い、最もよく適当なラインは回帰分析によって定めることができる。
Referances
「Ethylenethiourea露出された胎児のラットのanorectal奇形の開発の音波のハリネズミ、BMP4およびHoxの遺伝子」。
Mandhan P.、Quan Q.B.、Beasley S.、サリバンM。
J. Pediatr。Surg。41:2041- 2045(2006)