96 Wellsは人間のMyoイノシトールのオキシゲナーゼMIOX ELISAのキットをカスタマイズした

96 Wellsは人間のMyoイノシトールのオキシゲナーゼMIOX ELISAのキットをカスタマイズした

Cat.No E3211Hu

標準的なカーブの範囲:0.5ng/ml - 150ng/ml

感受性:0.23ng/ml

意図されていた使用

このサンドイッチ キットは血清、血しょう、細胞培養のsupernates、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートの人間のMyoイノシトールのオキシゲナーゼ（別名MIOX）の正確で量的な検出のためである。

試金の主義

このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）である。版は人間MIOXの抗体とプリコートされた。サンプルのMIOXの現在は加えられ、抗体への縛りは井戸で塗られる。そしてbiotinylated人間MIOXの抗体はサンプルのMIOXに縛り加えられ。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated MIOXの抗体に結合する。孵化によって解かれるStreptavidin-HRPが洗浄のステップの間に洗い流された後。基質の解決はそれから加えられ、色は人間MIOXの量に比例して成長する。反作用は酸性の付加で停止する解決を終わり、吸光度は450 nmで測定される。

提供される試薬

物質的な要求されるが、供給されない

• 37°C±0.5°C定温器
• 吸収性のペーパー
• 精密ピペットおよび使い捨て可能なピペットの先端
• きれいな管
• 脱イオンされるまたは蒸留水
• 450 ± 10nmの波長フィルターを持つMicroplateの読者

標本コレクション

血清は血清が室温で10-20分の間凝固するようにする。20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。

血しょうは抗凝固薬としてエチレンジアミン四酢酸かヘパリンを使用して血しょうを集める。2時の2000-3000のRPMの15分の遠心分離機のサンプル-コレクションの30分以内の8°C。

尿は生殖不能の管によって集まる。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。pleuroperitoneal液体および脳脊髄液を集めた場合、前述のプロシージャに続きなさい。

細胞培養の上澄みは生殖不能の管によって部品を分泌するために検査するとき集まる。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。supernatantsを注意深く集めなさい。細胞内の部品を検査した場合、およそ1 million/mlの細胞の集中に細胞の懸濁液を薄くする使用PBS （pH 7.2-7.4）。中の部品を放つ繰り返されたfreeze-thaw周期を通した損傷の細胞。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。

余分な血を完全に取除き、均質化の前に重量を量るべきPBS （pH 7.4）のティッシュの洗浄のティッシュ。ティッシュを細かく切り刻に、氷のガラス ホモジェナイザーとのPBS （pH7.4）の均質にしなさい。2-8°Cの雪解けかおよそ20分の2000-3000のRPMの-20°C.の遠心分離機の氷結。

ノート

• サンプル集中は試金で使用される前に予測されるべきである。サンプル集中が標準的なカーブの範囲の内になければ、ユーザーは彼らの特定の実験のための最適のサンプルを定めるために私達に連絡しなければならない。
• 5日以内に使用されるべきサンプルは2-8°C.サンプルでaliquotedべきまたは1か月以内の-20°Cか6か月以内の-80°Cで貯えられなければならない貯えられるべきである。Avoid氷結の雪解け周期を繰り返した。
• サンプルは試金を始める前の室温に持って来られるべきである。
• 使用の前にサンプルを集めるために遠心分離機にかけなさい。
• NaN3を含んでいるサンプルはホース ラディッシュの過酸化酵素（HRP）の活動を禁じると同時にテストすることができない。
• supernatantsを注意深く集めなさい。沈殿物が貯蔵の間に起こったときに、遠心分離は再度行われるべきである。
• 溶血は試験結果の妥当性に非常に影響を与えることができる。溶血を最小にするために心配を取りなさい。

*Sampleはこのキットと薄くすることができない。キットを準備するのに材料のために私達は使用するサンプル マトリックス干渉は不当に試金の特定性そして正確さを弱めるかもしれない。

概要

1. すべての試薬、サンプルおよび標準を準備しなさい。

2. 各井戸にサンプルおよびELISAの試薬を加えなさい。37°C.で1時間孵化させなさい。

3. 版を5回洗浄しなさい。

4. 37°C.で10分の基質の解決AおよびB. Incubateを加えなさい。

5. 停止する解決を加えれば色は成長する。

6. 10分以内のODの価値を読みなさい。

結果の計算

横の（x）軸線の集中に対して縦の（y）軸線の各標準のための平均ODの計画によって標準的なカーブをグラフのポイントを通した最もよく適当なカーブを引くために組み立てれば。これらの計算はコンピュータ ベースのカーブ付属品ソフトウェアと最もよく行い、最もよく適当なラインは回帰分析によって定めることができる。