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96 Wellsのマウスの高精度およびResistin敏感なELISAのキット
Cat.No E0263Mo
標準的なカーブの範囲:0.3ng/ml - 90ng/ml
感受性:0.13ng/ml
意図されていた使用
このサンドイッチ キットは血清、血しょう、細胞培養のsupernates、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートのマウスNesfatin1 （別名Retn）の正確で量的な検出のためである。
試金の主義
このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）である。版はマウスのRetnの抗体とプリコートされた。サンプルのRetnの現在は加えられ、抗体への縛りは井戸で塗られる。そしてマウスのRetnのbiotinylated抗体はサンプルのRetnに縛り加えられ。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated Retnの抗体に結合する。孵化によって解かれるStreptavidin-HRPが洗浄のステップの間に洗い流された後。基質の解決はそれから加えられ、色はマウスRetnの量に比例して成長する。反作用は酸性の付加で停止する解決を終わり、吸光度は450 nmで測定される。
提供される試薬
| 部品 | 量 |
| 標準ソリューション（96ng/ml） | 0.5ml x1 |
| プリコートされたELISAの版 | 12 * 8つの健康なストリップx1 |
| 標準的な希釈剤 | 3ml x1 |
| Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
| 解決を停止しなさい | 6ml x1 |
| 基質の解決A | 6ml x1 |
| 基質の解決B | 6ml x1 |
| 洗浄緩衝濃縮物（30x） | 20ml x1 |
| BiotinylatedのマウスのRetnの抗体 | 1ml x1 |
| ユーザーの指示 | 1 |
| 版のシーラー | 2 pics |
| ジッパー袋 | 1つのpic |
標本コレクション
血清は血清が室温で10-20分の間凝固するようにする。20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。
血しょうは抗凝固薬としてエチレンジアミン四酢酸かヘパリンを使用して血しょうを集める。2時の2000-3000のRPMの15分の遠心分離機のサンプル-コレクションの30分以内の8°C。
尿は生殖不能の管によって集まる。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。pleuroperitoneal液体および脳脊髄液を集めた場合、前述のプロシージャに続きなさい。
細胞培養の上澄みは生殖不能の管によって部品を分泌するために検査するとき集まる。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。supernatantsを注意深く集めなさい。細胞内の部品を検査した場合、およそ1 million/mlの細胞の集中に細胞の懸濁液を薄くする使用PBS （pH 7.2-7.4）。中の部品を放つ繰り返されたfreeze-thaw周期を通した損傷の細胞。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。
余分な血を完全に取除き、均質化の前に重量を量るべきPBS （pH 7.4）のティッシュの洗浄のティッシュ。ティッシュを細かく切り刻に、氷のガラス ホモジェナイザーとのPBS （pH7.4）の均質にしなさい。2-8°Cの雪解けかおよそ20分の2000-3000のRPMの-20°C.の遠心分離機の氷結。
*Sampleはこのキットと薄くすることができない。キットを準備するのに材料のために私達は使用するサンプル マトリックス干渉は不当に試金の特定性そして正確さを弱めるかもしれない。
試金プロシージャ
1. 指示されるようにすべての試薬、標準ソリューションおよびサンプルを準備しなさい。使用の前に室温にすべての試薬を持って来なさい。試金は室温で行われる。
2. 試金に必要なストリップの数を定めなさい。使用のためのフレームでストリップを挿入しなさい。未使用のストリップは2-8°C.で貯えられるべきである。
3. 標準に50μl標準をよく加えなさい。注:標準ソリューションがbiotinylated抗体を含んでいるので標準に抗体をよく加えてはいけない。
4. 40μlサンプルをサンプル井戸に井戸を見本抽出するためにそれから10μl反Retn抗体を加えるために加え、そしてサンプル井戸および標準的な井戸（よのない空白制御）に50μl streptavidin-HRPを加えなさい。よく混合しなさい。シーラーで版を覆いなさい。37°C.で60分を孵化させなさい。
5. シーラーを取除き、5回版を洗浄緩衝との洗浄しなさい。30秒から各ワシントン州の1分の少なくとも0.35 mlの洗浄緩衝に井戸を浸しなさい。自動化された洗浄のために、すべての井戸を吸い出し、洗浄緩衝が付いている井戸を入れ過ぎる洗浄緩衝との5回を洗浄しなさい。ペーパー タオルまたは他の吸収性材料に版にしみを付けなさい。
6. 50μl基質の解決Aを各井戸に加え、次に各井戸に50μl基質の解決Bを加えなさい。暗闇の37°Cで10分の新しいシーラーで覆われる版を孵化させなさい。
7. 50μlを停止する各井戸に解決を、青い色すぐに変わる黄色に加えなさい。
8. 停止解決を加えた後10のメヌエットの内の450 nmにmicroplateの読者セットを使用してすぐによくそれぞれの光学濃度（ODの価値）を定めなさい。
結果の計算
横の（x）軸線の集中に対して縦の（y）軸線の各標準のための平均ODの計画によって標準的なカーブをグラフのポイントを通した最もよく適当なカーブを引くために組み立てれば。これらの計算はコンピュータ ベースのカーブ付属品ソフトウェアと最もよく行い、最もよく適当なラインは回帰分析によって定めることができる。