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高いSpesificityおよび感受性のOsteocalcin犬のELISAのキット
Cat.No E0146Ca
試金の主義
このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）です。版は犬OTの抗体とプリコートされました。OTはサンプルで加えられ、井戸で塗られる抗体に結合します示します。そしてbiotinylated犬OTの抗体は加えられ、サンプルのOTに結合します。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated OTの抗体に結合します。孵化の後で解かれたStreptavidin-HRPは洗浄のステップの間に洗い流されます。基質の解決はそれから加えられ、色は犬OTの量に比例して成長します。反作用は酸性の付加で停止します解決を終わり、吸光度は450 nmで測定されます。
提供される試薬
| 部品 | 量 |
|
標準ソリューション（24ng/ml） |
0.5ml x1 |
| プリコートされたELISAの版 | 12 * 8つの健康なストリップx1 |
| 標準的な希釈剤 | 3ml x1 |
| Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
| 解決を停止して下さい | 6ml x1 |
| 基質の解決A | 6ml x1 |
| 基質の解決B | 6ml x1 |
| 洗浄緩衝濃縮物（30x） | 20ml x1 |
| Biotinylated犬OTの抗体 | 1ml x1 |
| ユーザーの指示 | 1 |
| 版のシーラー | 2 pics |
| ジッパー袋 | 1つのpic |
標本コレクション
血清は血清が室温で10-20分の間凝固するようにします。20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。
血しょうは抗凝固薬としてエチレンジアミン四酢酸かヘパリンを使用して血しょうを集めます。2時で2000-3000のRPMで15分のためのサンプルを-コレクションの30分以内の8°C遠心分離機にかけて下さい。
尿は生殖不能の管によって集まります。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。pleuroperitoneal流動および脳脊髄液を集めた場合、前述のプロシージャに続いて下さい。
細胞培養の上澄みは生殖不能の管によって検査するとき部品を分泌しなさい集まります。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。supernatantsを注意深く集めて下さい。細胞内の部品を検査した場合、およそ1 million/mlの細胞の集中に細胞の懸濁液を薄くするのにPBS （pH 7.2-7.4）を使用して下さい。中の部品を放つために繰り返された氷結雪解け周期を通して細胞を損なって下さい。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。
余分な血を完全に取除き、均質化の前に重量を量るべきPBS （pH 7.4）のティッシュの洗浄のティッシュ。ティッシュを細かく切り刻に、氷のガラス ホモジェナイザーとのPBS （pH7.4）の均質にして下さい。2-8°Cで分解するか、または-20°C.の遠心分離機でおよそ20分の2000-3000のRPMで凍らせて下さい。
試薬の準備
すべての試薬は使用の前の室温に持って来られるべきです。
標準は12ng/ml標準貯蔵液を発生させるために標準的な希釈剤の120μlの標準（24ng/ml）の120μlを再構成します。標準が希薄を作る前に穏やかな撹拌の15分の間坐るようにして下さい。6ng/ml、3ng/ml、1.5ng/mlおよび0.75ng/ml解決を作り出すために連続的に標準的な希釈剤と標準貯蔵液（12ng/ml）の1:2を薄くすることによって重複した標準的なポイントを準備して下さい。標準的な希釈剤はゼロ標準（0 ng/ml）として役立ちます。どの残りの解決でも-20℃で凍り、1か月以内に使用されるべきです。提案される標準ソリューションの希薄は次の通りあります:
| 12ng/ml | 標準的なNo.5 | 120μl元の標準+ 120μl標準の希釈剤 |
| 6ng/ml | 標準的なNo.4 | 標準120μl No.5 + 120μl標準の希釈剤 |
| 3ng/ml | 標準的なNo.3 | 標準120μl No.4 + 120μl標準の希釈剤 |
| 1.5ng/ml | 標準的なNo.2 | 標準120μl No.3 + 120μl標準の希釈剤 |
| 0.75ng/ml | 標準的なNo.1 | 標準120μl No.2 + 120μl標準の希釈剤 |
| 標準的な集中 | 標準的なNo.5 | 標準的なNo.4 | 標準的なNo.3 | 標準的なNo.2 | 標準的なNo.1 |
| 24ng/ml | 12ng/ml | 6ng/ml | 3ng/ml | 1.5ng/ml | 0.75ng/ml |
洗浄緩衝1x洗浄緩衝の500のmlをもたらすために脱イオンされるへの洗浄緩衝濃縮物30xの希薄な20mlまたは蒸留水。水晶が濃縮物で形作ったら、水晶が完全に分解したまで穏やかの組合せ。
参照
[1"生物学的に活動的で牛のような成長ホルモンのエシェリヒア属大腸菌の高レベル表現。「ジョージH.J.、L'Italien J.J.、Pilacinski W.P.のガラス製造人D.L.、Krzyzek R.A.DNA 4:273- 281(1985)