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96の井戸の特定性および感受性のラットGHRL ELISAのキット
Cat.No E0896Ra
標準的なカーブの範囲:40ng/L - 12000ng/L
感受性:20.56ng/L
サイズ:96の井戸
貯蔵:終わる6ヶ月の貯蔵のための2-8°C.で試薬を参照します有効期限を保ちます-20°C.のAvoidによって繰り返される雪解け周期でそれを貯えて下さい。個々の試薬が開けばキットが1か月以内に使用されることが推薦されます。
*このプロダクトは研究の使用だけのために、ない診断のプロシージャの使用のためです。それは非常に使用の前にこの指示を完全に読むことを推薦しますあります。
試金の主義
このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金（ELISA）です。版はラットGHRLの抗体とプリコートされました。GHRLはサンプルで加えられ、井戸で塗られる抗体に結合します示します。そしてbiotinylatedラットGHRLの抗体は加えられ、サンプルのGHRLに結合します。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated GHRLの抗体に結合します。孵化の後で解かれたStreptavidin-HRPは洗浄のステップの間に洗い流されます。基質の解決はそれから加えられ、色はラットGHRLの量に比例して成長します。反作用は酸性の付加で停止します解決を終わり、吸光度は450 nmで測定されます。
標本コレクション
血清は血清が室温で10-20分の間凝固するようにします。20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。
血しょうは抗凝固薬としてエチレンジアミン四酢酸かヘパリンを使用して血しょうを集めます。2時で2000-3000のRPMで15分のためのサンプルを-コレクションの30分以内の8°C遠心分離機にかけて下さい。
尿は生殖不能の管によって集まります。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。pleuroperitoneal流動および脳脊髄液を集めた場合、前述のプロシージャに続いて下さい。
細胞培養の上澄みは生殖不能の管によって検査するとき部品を分泌しなさい集まります。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。supernatantsを注意深く集めて下さい。細胞内の部品を検査した場合、およそ1 million/mlの細胞の集中に細胞の懸濁液を薄くするのにPBS （pH 7.2-7.4）を使用して下さい。中の部品を放つために繰り返された氷結雪解け周期を通して細胞を損なって下さい。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。
余分な血を完全に取除き、均質化の前に重量を量るべきPBS （pH 7.4）のティッシュの洗浄のティッシュ。ティッシュを細かく切り刻に、氷のガラス ホモジェナイザーとのPBS （pH7.4）の均質にして下さい。2-8°Cで分解するか、または-20°C.の遠心分離機でおよそ20分の2000-3000のRPMで凍らせて下さい。
注意して下さい
サンプル集中は試金で使用される前に予測されるべきです。サンプル集中が標準的なカーブの範囲の内になければ、ユーザーは彼らの特定の実験のための最適のサンプルを定めるために私達に連絡しなければなりません。
5日以内に使用されるべきサンプルは2-8°C.サンプルでaliquotedべきまたは1か月以内の-20°Cか6か月以内の-80°Cで貯えられなければなりません貯えられるべきです。avoid氷結の雪解け周期を繰り返しました。
サンプルは試金を始める前の室温に持って来られるべきです。
使用の前にサンプルを集める遠心分離機。
NaN3を含んでいるサンプルはホース ラディッシュの過酸化酵素(HRP)の活動を禁じると同時にテストすることができません。
supernatantsを注意深く集めて下さい。沈殿物が貯蔵の間に起こったときに、遠心分離は再度行われるべきです。
*サンプルはこのキットと薄くすることができません。キットを準備するのに材料のために私達は使用しますサンプル マトリックス干渉は不当に試金の特定性そして正確さを弱めるかもしれません。
試薬の準備
すべての試薬は使用の前の室温に持って来られるべきです。
標準は標準の120μlを再構成します（12800ng/L） 6400ng/L標準貯蔵液を発生させる標準的な希釈剤の120μlと。標準が希薄を作る前に穏やかな撹拌の15分の間坐るようにして下さい。連続的に標準貯蔵液を薄くすることによって重複した標準的なポイントを準備して下さい（6400ng/L） 3200ng/L、1600ng/L、800ng/Lおよび400ng/L解決を作り出す標準的な希釈剤との1:2。標準的な希釈剤はゼロ標準（0 ng/L）として役立ちます。どの残りの解決でも-20°Cで凍り、1か月以内に使用されるべきです。提案される標準ソリューションの希薄は次の通りあります:
| 6400ng/L | 標準的なNo.5 | 120μl元の標準+ 120μl標準の希釈剤 |
| 3200ng/L | 標準的なNo.4 | 標準120μl No.5 + 120μl標準の希釈剤 |
| 1600ng/L | 標準的なNo.3 | 標準120μl No.4 + 120μl標準の希釈剤 |
| 800ng/L | 標準的なNo.2 | 標準120μl No.3 + 120μl標準の希釈剤 |
| 400ng/L | 標準的なNo.1 | 標準120μl No.2 + 120μl標準の希釈剤 |
| 標準的な集中 | 標準的なNo.5 | 標準的なNo.4 | 標準的なNo.3 | 標準的なNo.2 | 標準的なNo.1 |
| 12800ng/L | 6400ng/L | 3200ng/L | 1600ng/L | 800ng/L | 400ng/L |
洗浄緩衝1x洗浄緩衝の500のmlをもたらすために脱イオンされるへの洗浄緩衝濃縮物30xの希薄な20mlまたは蒸留水。水晶が濃縮物で形作ったら、水晶が完全に分解したまで穏やかの組合せ。
概要
1. すべての試薬、サンプルおよび標準を準備して下さい。
2. それぞれにサンプルおよびELISAの試薬をよく加えて下さい。37°C.で1時間孵化させて下さい。
3. 版を5回洗浄して下さい。
4. 37°C.で10分の基質の解決AおよびB. Incubateを加えて下さい。
5. 停止します解決を加えれば色は成長します。
6. 10分以内のODの価値を読んで下さい。
参照
Baldanzi G.、Filigheddu N.、Cutrupi S.、Catapano F.、Bonissoni S.、Fubini A.、Malan D.、Baj G.、Granata R.、Broglio F.、Papotti M.、Surico N.、Bussolino F.、Isgaard J.、Deghenghi R.、Sinigaglia F.、Prat M.、Muccioli G.、Ghigo E.、Graziani A。
J. Cell Biol. 159:1029- 1037(2002)