分子生物学の等級のプロティナーゼKの解決N9012

プロティナーゼKの解決

研究の使用だけのための分子生物学の等級、

猫NO N9012

部品

貯蔵

-20ºCは推薦した。プロティナーゼKの解決の保存性は貯えられたとき4ºCの下で密封されて1年である。プロティナーゼKの解決は生物アイスパックでまたは室温で出荷される。

記述

プロティナーゼKは脂肪性の、芳香または疎水性アミノ酸のカルボキシル基の側面でペプチド結合を裂くendolyticプロテアーゼである。プロティナーゼKはセリーンのプロテアーゼとして分類される。この酵素が加水分解される最も小さいペプチッドはtetrapeptideである。

特徴

•使用可能な解決

•組換えのプロティナーゼK

•反作用プロダクトの広い範囲の能動態

適用

•培養された細胞およびティッシュからのゲノムDNAの分離

•DNAおよびRNAを隔離する場合のティッシュまたは細胞ラインからのDNasesおよびRNasesの取り外し

•酵素の局在化の決定

•PCRプロダクトのクローニング効率の改善

品質管理

DNaseの活動:どれも37ºCのλ DNAとの孵化6 hrsの後の探索可能な酵素活性。

RNaseの活動:どれも25ºCのRNAとの孵化16 hrsの後の探索可能なリボヌクレアーゼの活動。

源

遺伝的に符号化するクローンとして作られた遺伝子が付いているイースト菌からEngyodontiumのアルバム（Tritirachiumのアルバム） endolyticプロテアーゼを設計した。

分子量

29.3 kDaの単量体。

活動単位の定義

酵素の1単位は37°Cで1分、基質として変化させたヘモグロビンを使用してpH 7.5の1 µmolのチロシンに相当してFolin肯定的なアミノ酸およびペプチッドを解放する。

酵素活性は次の混合物で試金される:0.08 Mのカリウムの隣酸塩（pH 7.5）、5つのMの尿素、NaCl 4つのmMの、CaCl 3つのmMの_2つそして16.7 mg/mlヘモグロビン。

貯蔵の緩衝

酵素は供給される:50のmM Tris HCl （pH 7.5）、カリフォルニア²⁺およびグリセロールを安定装置として含んでいる。

阻止および不活性化

抑制剤:プロティナーゼKは金属のchelatorsによって、チオール反応試薬または特定のトリプシンおよびキモトリプシンの抑制剤によって不活性にならない。Phenylmethylsulfonylのフッ化物およびdiisopropyl phosphorofluoridateは完全に酵素を禁じる。

10分の95°Cで熱することによって不活性にされる。

ノート

•50-55°C.の最適活動。

•酵素の急速な変性は65°C.の上の温度に起こる。

•プロティナーゼKのための推薦された働く集中は0.05-1 mg/mlである。酵素の活動は0.2-1% SDSまたは1-4 Mの尿素によって刺激される。

•カリフォルニア^2+は自己分解からプロティナーゼKを保護し、熱安定性を高め、そしてプロティナーゼK.の基質の結合場所のための規定する機能がある。

•広いpHの範囲上の馬小屋:4.0-12.5、最適pH 7.5-8.0。

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