マウスE CAD E Cadherin Elisaのキットの研究はサンドイッチ方法だけ使用する

マウスE-CadherinのE CAD ELISAのキット

このELISAのキットは方法としてサンドイッチELISAを使用する。このキットで提供されるMicroelisaのstripplateはE CADに特定の抗体とプリコートされた。標準かサンプルは適切なMicroelisaのstripplateの井戸に加えられ、特定の抗体に結合した。それから西洋わさびの過酸化酵素（HRP） - E CADのためにMicroelisaの各stripplateに特定の活用された抗体はよく加えられ、孵化する。自由な部品は洗い流される。TMBの基質の解決は各井戸に加えられる。E CADおよびHRPによって活用されるE CAD抗体を含んでいるそれらの井戸だけ色で青いようで、次に停止解決の付加の後で黄色い回る。光学濃度（OD）は450 nmの波長でspectrophotometrically測定される。ODの価値はE CADの集中に比例している。標準的なカーブとサンプルのODを比較することによってサンプルのE CADの集中を計算できる。

キットを与えられる材料

プロシージャ

標準の希薄

1.Ten井戸はMicroelisaのstripplateの標準のために置かれる。よく1およびよく2では、100μl標準ソリューションおよび50μl標準的な希薄の緩衝はよく加えられ、混合される。よく3およびよく4では、よく1からの100μl解決はおよびよく2それぞれ加えられる。それから50μl標準的な希薄の緩衝は加えられ、よく混合される。50μl解決は井戸3およびよく4.から放棄される。よく5およびよく6では、よく3からの50μl解決はおよびよく4それぞれ加えられる。それから50μl標準的な希薄の緩衝は加えられ、よく混合される。よく7およびよく8では、よく5からの50μl解決はおよびよく6それぞれ加えられる。それから50μl標準的な希薄の緩衝は加えられ、よく混合される。よく9およびよく10では、よく7からの50μl解決はおよびよく8それぞれ加えられる。それから50μl標準的な希薄の緩衝は加えられ、よく混合される。50μl解決は井戸9およびよく10.から放棄される。希薄の後で、すべての井戸の総容積は50μlであり、集中は24ng/ml、16 ng/ml、8 ng/ml、4ng/mlおよび2ng/ml、それぞれである。

2. Microelisaのstripplateでは、井戸を空白制御として空けておきなさい。サンプル井戸では、40μlサンプル希薄の緩衝はおよび10μlサンプル加えられる（希薄の要因は5）である。サンプルは底に健康な壁に触れないで荷を積まれるべきである。穏やかな動揺とよく混合しなさい。

3. 孵化:かど金の膜によって密封されるの後で37℃で30分を孵化させなさい。

4. 希薄:蒸留水（30回および48Tのための96Tのための20回）と集中された洗浄の緩衝を薄くしなさい。

5. 洗浄:注意深くかど金の膜の皮をむき、洗浄解決と吸い出し、そして補充しなさい。30秒の間休息の後で洗浄解決を放棄しなさい。5回の洗浄プロシージャを繰り返しなさい。

6. 空白制御を除く各井戸に50のμlのHRP共役試薬をよく加えなさい。

7. ステップ3.に記述されているように孵化。

8. ステップ5.に記述されているように洗浄。

9. 着色:50のμlの色原体の解決Aおよび50のμlの色原体の解決B各井戸に、穏やかに動揺の組合せを加え、15分の37℃で孵化させなさい。着色の間にライトを避けなさい。

10. 終了:反作用を終えるためにμlが各井戸に解決を停止する50を加えなさい。井戸の色は青から黄色になるために変わるべきである。

11. マイクロ プレートの読者を使用して450nmの読まれた吸光度O.D。空白制御のODの価値はゼロとしてよく置かれる。試金は15分以内に加えることの後で停止する解決を遂行されるべきである。

精密

内部試金の精密（試金内の精密）:低く、中間高レベルE CADの3つのサンプルは20回1つの版の、それぞれテストされた。

相互試金の精密（試金間の精密）:低く、中間高レベルE CADの3つのサンプルは3つの版、各版の8つの反復実験でテストされた。

CV （%） = SD/meanX100

内部試金:CV<10>

相互試金:CV<12>

試金の範囲

0.6pg/ml -80pg/ml

感受性:

0.1 pg/ml

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