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特定性のラットのMannma高い結合蛋白質のCustomizedMannanの結合のLectin ELISAのキット
Cat.No E0629のRA
標準的なカーブの範囲:0.5ng/ml - 100ng/ml
感受性:0.25ng/ml
貯蔵:終わる6ヶ月の貯蔵のための2-8°C.で試薬を参照します有効期限を保ちます-20°C.のAvoidによって繰り返される雪解け周期でそれを貯えて下さい。個々の試薬が開けばキットが1か月以内に使用されることが推薦されます。
精密
内部試金の精密(試金内の精密)は1つの版で知られていた集中の3つのサンプル内部試金の精密を査定するためにテストされました。
相互試金の精密(試金間の精密)は別の試金で知られていた集中の3つのサンプル相互試金の精密を査定するためにテストされました。
CV (%) = SD/mean X 100
内部試金:CV<8>
相互試金:CV<10>
意図されていた使用
このサンドイッチ キットはラットのMannmaの結合蛋白質、血清、血しょう、細胞培養のsupernates、細胞のlysates、ティッシュのホモジュネートのマンナンの結合のLectin (別名MBP/MBL)の正確で量的な検出のためです。
試金の主義
このキットは酵素つながれたImmunosorbentの試金(ELISA)です。版はラットMBP/MBLの抗体とプリコートされました。MBP/MBLはサンプルで加えられ、井戸で塗られる抗体に結合します示します。そしてbiotinylatedラットMBP/MBLの抗体は加えられ、サンプルのMBP/MBLに結合します。それからStreptavidin-HRPは加えられ、Biotinylated MBP/MBLの抗体に結合します。孵化の後で解かれたStreptavidin-HRPは洗浄のステップの間に洗い流されます。基質の解決はそれから加えられ、色はラットMBP/MBLの量に比例して成長します。反作用は酸性の付加で停止します解決を終わり、吸光度は450 nmで測定されます。
注意
標本コレクション
血清は血清が室温で10-20分の間凝固するようにします。20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。
血しょうは抗凝固薬としてエチレンジアミン四酢酸かヘパリンを使用して血しょうを集めます。2時で2000-3000のRPMで15分のためのサンプルを-コレクションの30分以内の8°C遠心分離機にかけて下さい。
尿は生殖不能の管によって集まります。およそ20分の2000-3000のRPMの遠心分離機。pleuroperitoneal流動および脳脊髄液を集めた場合、前述のプロシージャに続いて下さい。
細胞培養の上澄みは生殖不能の管によって検査するとき部品を分泌しなさい集まります。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。supernatantsを注意深く集めて下さい。細胞内の部品を検査した場合、およそ1 million/mlの細胞の集中に細胞の懸濁液を薄くするのにPBS (pH 7.2-7.4)を使用して下さい。中の部品を放つために繰り返された氷結雪解け周期を通して細胞を損なって下さい。およそ20分の2000-3000のRPMで遠心分離機にかけて下さい。
余分な血を完全に取除き、均質化の前に重量を量るべきPBS (pH 7.4)のティッシュの洗浄のティッシュ。ティッシュを細かく切り刻に、氷のガラス ホモジェナイザーとのPBS (pH7.4)の均質にして下さい。2-8°Cで分解するか、または-20°C.の遠心分離機でおよそ20分の2000-3000のRPMで凍らせて下さい。
注意して下さい
*Sampleはこのキットと薄くすることができません。キットを準備するのに材料のために私達は使用しますサンプル マトリックス干渉は不当に試金の特定性そして正確さを弱めるかもしれません。
概要
1. すべての試薬、サンプルおよび標準を準備して下さい。
2. それぞれにサンプルおよびELISAの試薬をよく加えて下さい。37°C.で1時間孵化させて下さい。
3. 版を5回洗浄して下さい。
4. 37°C.で10分の基質の解決AおよびB. Incubateを加えて下さい。
5. 停止します解決を加えれば色は成長します。
6. 10分以内のODの価値を読んで下さい。
結果の計算
標準的なカーブを横の(x)軸線の集中に対して縦の(y)軸線で標準それぞれのための平均ODの計画によって組み立て、グラフのポイントを通した最もよい適合のカーブを引いて下さい。これらの計算はコンピュータ ベースのカーブ付属品ソフトウェアと最もよく行い、最もよい適合ラインは回帰分析によって定めることができます。
Referances
「焦点大脳の虚血引き起こしますラットの頭脳のperi
infarct区域の増加された髄鞘基本的な蛋白質そして成長準蛋白質43の遺伝子のトランスクリプションを」。は
Gregersen R.、Christensen T.、Lehrmann E.、Diemer N.H.、Finsen B。
Exp.の頭脳Res 138:384- 392(2001)