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金の逆Transcriptase R3001 （2,000U） R3002 （10,000U）
金の逆Transcriptase
研究の使用だけのため
部品
| 部品 | R3001 （U） 2,000 | R3002 （U） 10,000 |
| 5つの×の金の緩衝 | 100 μl | 500 μl |
| 金の逆Transcriptase （200 U/μl） | 10 μl | 50 μl |
貯蔵
この試薬は-30~15°C.で保たれるべきである。
記述
金の逆TranscriptaseはM-MLV （RNase H-）の逆Transcriptaseに基づいて生体外の分子進化によって得られる新しい逆のtranscriptaseである。cDNAの最初の繊維は37~55°C.金の逆Transcriptaseで複雑な二次構造が付いているRNAの型板の逆のトランスクリプションのために非常に適しているかなり改善された感受性、特定性、熱安定性および半減期を促進することを持っている総合することができる。金の逆Transcriptaseに長いcDNAの統合および実物大のcDNAの図書館の高い比率の構造に使用することができるより強い重合および延長能力がある。
単位定義
多（RA）·Oligo （dT）型板/プライマーとして使用された。10分の37°Cで、acid-insoluble物質として1つのnmolのdTTPを加えるために必要な酵素の量は活動（u）の1つの単位と定義された。
品質管理
Exonucleaseの残余の検出:200 Uこのプロダクトのおよび50 pmol single-stranded DNAの基質は16 hのための37°Cで孵化し、DNAの電気泳動バンドは変性のページの電気泳動の後で変わらなかった。
endonucleaseの残余の検出:pBR322 DNAのこのプロダクトそして0.3のμgの200 Uは4 hのための37°Cで孵化し、プラスミッドの電気泳動バンドはアガロースのゲルの電気泳動によって変わらなかった。
RNaseの残余の検出:200のUのプロダクトおよび293個の細胞のRNAの1つのμgは30分の37°Cで孵化し、RNAの電気泳動バンドはアガロースのゲルの電気泳動によって不変だった。
E.coli DNAの残余の検出:60 Uの核酸の残余はエシェリヒア属大腸菌gDNA特定のTaqManのqPCRによって検出され、エシェリヒア属大腸菌のゲノムの残余は10枚のコピーよりより少しだった。
機能検出1: 200のUの酵素は逆のトランスクリプション システムに加えられた、1 μgのヒーラ細胞の総RNAは型板、プライマーとしてOligo （dT） 23として使用され、反作用はVINの遺伝子のPCRの拡大のために45 min.1/10 cDNAプロダクトのための50°Cで取られた行なわれた。EBの汚損のアガロースのゲルの電気泳動は単一の4.6 kbバンドを示した。
機能検出2: 200のUの酵素は逆のトランスクリプション システムに加えられた、1ページのヒーラ細胞の総RNAは型板、プライマーとしてOligo （dT） 23として使用され、反作用はGAPDHの遺伝子のPCRの拡大のために30 min.1/10 cDNAプロダクトのための50°Cで取られた行なわれた。EBの汚損のアガロースのゲルの電気泳動は単一の550のbpバンドを示した。
機能検出3: 500 NGのヒーラ細胞は型板、プライマーとしてOligo （dT） 23 VN、45 min.1/10 cDNAプロダクトのための50°C反作用としてPolεの遺伝子のPCRの拡大のためにRNAを取られた合計する。アガロースのゲルの電気泳動、汚れるEBは単一の7.1 kb （GCが豊富な）バンド見ることができる。
注意を必要とする問題
RNaseの汚染を防ぎなさい
実験区域をきれい保ちなさい。きれいな手袋およびマスクは操作の間に身に着けられているべきである。RNaseなし遠心管のために保障され、実験で使用された先端および他の消耗品をピペットで移す。
プライマー選択
実験をであるPCR追いなさい
型板がeukaryotic起源なら、Oligo dTは一般に優先する、3'と組み合わせられて多実物大のcDNAの最高の収穫のためのeukaryotic mRNAの尾。
遺伝子の特定のプライマー（GSP）に最も高い特定性がある。但し、時として、GSPはPCRの反作用のためにcDNA.の最初の繊維の統合をこの時点で導くことができない効果的に使用した逆のトランスクリプションはOligo dTか任意hexamersを使用してやり直すことができる。
任意hexamersに最も低い特定性およびすべてのRNAが、mRNAを含んで、rRNAあり、tRNAは任意hexamersのために型板として、使用できる。任意hexamersはプライマーとしてOligo dTまたは遺伝子特定のプライマー（GSP）の使用が効果的にcDNAの統合を導くことができないターゲット地域に複雑な二次構造か高いGCの内容があるか、または型板がprokaryotic時使用することができ。
実験をであるqPCR追いなさい
Oligo dTはmRNAの各地域の同じcDNAの統合の効率で任意hexamersと起因し混合し、量的な結果の信用そして反復性の改善を助ける。
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