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1) 核酸抽出 適切な抽出キットを使用して標本からDNAを抽出する.精製の最終段階では,ヌクレイン酸を約100μlの精製バッファ (TEまたはヌクレアースフリーH2O) で溶解することが推奨されます.精製されたヌクレイン酸はすぐに使用するか, -20°Cに保管する必要があります.
2) 陽性対照剤 陽性対照体は,再水化する前に,最大12ヶ月間,環境温度で保存することができます.使用前には,TEバッファまたはヌクレアースフリーH2Oの250 μlを追加して再水化する必要があります.低速で15〜20秒間渦巻き,低速で15〜20秒間遠心分離します.すぐに使用するか,−20°Cで保管してください.
3) リアルタイムRT-PCRミックス準備
A) 真空包装を開き,反応剤を含む8管のストライプを取り出し,ペレットがチューブの底にあることを確認します (必要に応じてチューブの数をカットします).提供されたチューブが,あなたの楽器と互換性がない場合試料のペレットを 器具と互換性のある光学チューブに移動します
B) 管を開けてキャップを捨て (リアルタイムPCRマシンには適さない) 氷の上に反応混合物を準備します.
* 核酸のない水は負のコントロールとして使用できます.
C) 管を光学シールフィルム (提供されていない) で光学キャップまたは96孔プレートでシールします.
D) 低速でチューブを10~15秒間渦巻き,3000rpmで20秒間遠心分離し,リアルタイムPCR機器に置きます.
3) RT-PCR設定:反応容量を25μlと設定し,PCR増幅手順は下記のようにします.FAM (N遺伝子),HEX (E遺伝子) を収集します.ROX (Orf1ab) とCY5 (RNase P遺伝子) の 60°Cのフラウレッセンスを, そして NONE を受動参照として選択します.
4) 結果分析と解釈 計器の指示に従って,限界線を設定する.
A) 品質管理
B) サンプル結果の解釈
技術パラメータ:
| 製品名 | MPXV PCR マンキーポックスウイルス 凍結乾燥マルチプレックス リアルタイム |
| パッケージ | 48 テスト/キット |
| サンプルタイプ |
1) 皮膚の損傷組織 膀?? 液体,排水液,または皮質 皮膚の腫れのスワップ,口腔スワップなど 2) 血清 |
| 試験方法 | PCR |
| フォーマット | 反応剤 |
| タイプ | PCR |
| 保存期間 | 18ヶ月 |
| 貯蔵温度 | 2-8°C |
| 検出制限 | 高度な感受性 |
| 読書 時間 | 90〜120分 |