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検出ミルク 96Wells/Kit ISO9001 のためのメラミン ELISA テスト キット
1.原則
この検査キットは、サンプル中のメラミンを検出するための間接競合酵素イムノアッセイに基づいています。カップリング抗原は、マイクロウェルストライプにプレコートされています。サンプル中のメラミンと、マイクロウェルストライプにプレコートされたカップリング抗原は、抗メラミン抗体をめぐって競合します。酵素コンジュゲートの添加後、着色のためにTMB基質を添加する。試験サンプルの光学濃度 (OD) 値は、サンプル中のメラミン濃度と負の相関があります。この値を標準曲線と比較し、続いてメラミン濃度を取得します。
2.ミルクテストキットコンポーネント
| 1 | マイクロウェルストリップ |
12 ストリップ、8 ストリップは取り外し可能 それぞれの井戸 |
|
| 2 | 6×標準液（各1mL） | 0ppb | 0.5ppb |
| 1.5ppb | 4.5ppb | ||
| 13.5ppb | 40.5ppb | ||
| 3 | スパイク標準液 | 1ppm | 1ml |
| 4 | 酵素複合体 | 7ml | 赤い帽子 |
| 5 | 抗体作業溶液 | 7ml | ブルーキャップ |
| 6 | 基板A | 7ml | 白い帽子 |
| 7 | 基板B | 7ml | ブラックキャップ |
| 8 | ソリューションを停止 | 7ml | 黄色い帽子 |
| 9 | 10x サンプル抽出 A 溶液 | 50ml | 透明キャップ |
| 10 | 20x サンプル抽出 B 溶液 | 50ml | ブルーキャップ |
| 11 | 20×濃縮洗浄バッファー | 15ml | 白い帽子 |
3. 技術仕様
感度: 0.5ppb
インキュベーター温度：25℃
インキュベーター時間：30分～15分
検出限界:
バター、キャンディー、チーズ 10ppb
交差反応率:
メラミン 100%
回収率：
バター 90±25%
キャンディー、チーズ 95±25%
4. 必要だが提供されていない資料
1) 使用機材：マイクロプレートリーダー、プリンター、ボルテックス、遠心分離機、メスピペット、天秤（逆感度0.01g）、70℃ウォーターバス。
2) マイクロピペッター: シングルチャンネル 20~200 μL、100~1000 μL;マルチチャンネル 30～300 μl;
5. サンプルの前処理
注意事項（前処理の前に以下の点に注意してください）
1) 使い捨てチップのみが実験に使用でき、別の試薬に使用する場合はチップを交換する必要があります。
2) 実験の前に、実験結果を妨げる汚染を避けるために、各実験装置をきれいにし、必要に応じて再洗浄する必要があります。
ソリューションの準備
1) サンプル抽出 A 溶液
サンプル抽出 A 溶液を 1:9 の脱イオン水で 10 倍に希釈します。
2) 試料抽出 B 液
B 溶液を抽出するサンプルを 1:19 の脱イオン水で 20 倍に希釈します。
5.1 バター
1) 1 g の新鮮なバターを 50 ml 遠沈管に取り、5 ml のサンプル抽出 A 溶液を加え、70℃の水浴で 5 分間インキュベートし、ボルテックスして 5 分間振とうし、室温で 4000 r/min 以上で 5 分間遠心分離します。
2) 分析のために 50ul の下層液体を採取します。
サンプルの希釈倍率: 5
5.2 キャンディー、チーズ
1) 新鮮なサンプル 1 g を 50 ml 遠沈管に取り、5 ml のサンプル抽出 B 溶液を加え、70℃のウォーターバスで 5 分間インキュベートし、ボルテックスして 5 分間振とうし、室温で 4000 r/min 以上で 5 分間遠心分離します。
2) 分析のために 50ul の下層液を採取します
サンプルの希釈倍率: 5
6. ELISA手順
6.1 指示
1 すべての試薬とマイクロウェルストリップを室温 (20 ～ 25 ℃) に戻します。
2 すべての試薬は、使用後すぐに 2 ～ 8 ℃ に戻してください。
3 ELISA 分析の再現性は、プレート洗浄の一貫性に大きく依存します。プレート洗浄の正しい操作は、ELISA の手順の重要なポイントです。
4 一定温度でのインキュベーションでは、すべてのサンプルと試薬が光にさらされないようにし、各マイクロプレートをカバー メンブレンで密閉する必要があります。
6.2 操作手順
1)テストキットを室温 (20 ～ 25 ℃) に少なくとも 30 分間置きます。各試薬は使用前に均等に振ってください。必要なマイクロウェル ストリップをプレート フレームに入れます。未使用のマイクロプレートを再密封し、凍結せずに2～8℃で保存しました。
2)溶液の調製: 20 倍濃縮洗浄バッファー 15 mL を脱イオン水で 300 mL に希釈して使用します。
3)番号付け: サンプルおよび標準溶液に従ってマイクロウェルに番号を付けます。各サンプルと標準溶液は、重複して実行する必要があります。彼らの位置を記録します。
4)サンプル/標準液 50μL を加えて 2 連のウェルに分け、次に酵素複合体 50μL を加え、次に抗体作業溶液 50μL を各ウェルに加え、よく振ってマイクロプレートをカバーメンブレンで密閉し、25℃で 30 分間インキュベートします。
5)ウェルから液体を注ぎ、希釈した洗浄バッファーでマイクロプレートを 250 μL/ウェルで 5 ～ 6 回洗浄します。そのたびに、ウェルを希釈した洗浄バッファーに 15 ～ 30 秒間浸し、吸水紙の上でバタバタさせて乾かします (バタバタした後に気泡がある場合は、清潔な先端でそれらを切り取ってください)。
6)着色: 基板 A の 50 μ L を追加し、基板 B の 50 μ L を各ウェルに追加します。プレートを手で振って静かに混合し、25 ℃ で 15 分間暗所でインキュベートして発色させます。
7）測定: 50 μL の停止液を各ウェルに加えます。プレートを手で振って穏やかに混合します。マイクロ プレート リーダーの波長を 450 nm に設定して、すべてのウェルの OD 値を決定します。(2 波長 450/630nm で 5 分以内に OD 値を読み取ることをお勧めします)。
7. 結果判定
結果を判断する方法は 2 つあります。前者は大まかな判断であり、後者は定量的な判断です。サンプルの OD 値は、メラミンの含有量と負の相関があることに注意してください。
7.1 定性的決定
濃度範囲 (ng/mL) は、試験サンプルの平均 OD 値と標準溶液の平均 OD 値を比較することで求めることができます。サンプルⅠのOD値を0.3、サンプルⅡのOD値を1.0とすると、標準液のOD値は0ppbで2.043、0.5ppbで1.604、1.5ppbで1.101、4.5ppbで0.512、13.5ppbで0.161となります。 、40.5ppb に対して 0.055 であるため、サンプルⅠの濃度範囲は 4.5 ～ 13.5ppb、サンプルⅡの濃度範囲は 1.5 ～ 4.5ppb です。
7.2 定量的測定
吸光度値の平均値は、試験サンプルと標準溶液の平均 OD 値 (B) を最初の標準溶液 (0 標準) の OD 値 (B0) で割り、100 を掛けた百分率に相当します。 ％、 あれは
| 吸光度値のパーセンテージ = | B | ×100% |
| B0 |
B - 試験サンプルまたは標準溶液の平均 (ダブルウェル) OD 値
B0—0ng/mL 標準溶液の平均 OD 値
標準溶液の吸収率とメラミン標準溶液の片対数値 (ng/mL) をそれぞれ Y 軸と X 軸として標準曲線を描きます。標準曲線にその吸収率を組み込むことにより、標準曲線からテスト サンプルの対応する濃度を読み取ります。得られた値は、その後、対応する希釈倍数で乗算され、最終的にサンプル中のメラミン濃度が得られます。
8. 注意事項
1)室温が25℃以下の場合や、試薬や検体の温度が室温（20～25℃）に戻されていない場合は、標準OD値が低くなります。
2)洗浄プロセスにおけるマイクロプレートの乾燥は、非線形の標準曲線や望ましくない再現性などの状況を伴います。そのため、洗浄後すぐに次のステップに進みます。
3)均一に混合しないと、望ましくない再現性が生じます。
4)停止液は 2 M 硫酸溶液です。皮膚に触れないようにしてください。
5)有効期限を過ぎたキットは使用しないでください。キットの希釈または粗悪な試薬を使用すると、感度および検出 OD 値が変化します。ロット番号の異なるキットの試薬を入れ替えて使用しないでください。
6)未使用のマイクロプレートはオートシール袋に入れて再封してください。標準物質および無色の発色剤は感光性であるため、直接光にさらすことはできません。
7)このソリューションの退化を示す任意の色で着色ソリューションを破棄します。標準液 1(0ppb)の検出値が 0.5 未満の場合は、その変性を示します。
8)反応温度は25℃が最適で、温度が高すぎても低すぎても検出感度やOD値が変化します。
9. 保管と賞味期限
保存方法：冷凍せずに2～8℃で保存してください。
有効期限：12ヶ月。製造日は箱に記載されています
注: マイクロプレートの真空パッケージに漏れがある場合でも、使用は有効です。テスト結果には影響しません。リラックスして使用してください。
Q1: 発送までどのくらいかかりますか?
A1: 通常7営業日以内に発送いたします。
Q2: OEM/ODM をサポートしていますか?
A2: 対応可能です。お客様の特定のニーズと特定の数量に応じてカスタマイズできます。
Q3: あなたの工場は品質管理に関してどのようにやっていますか?
A3: 私たちは ISO9001 認証と ISO13485 認証を取得しています。これまでのところ、すべての製造プロセスには標準的な規則があり、政府の関連する行動と法律に準拠しています。
Q4: アフターサービスは保証されていますか?
A4: 私たちは専門的なオンライン技術アフターサービスを提供しています.実験中に製品が故障した場合、私たちは提供することができます
電話、ビデオ、その他の形式によるマンツーマンのガイダンス。
Q5: 最小注文数量は?
A5: 1キットです。
Q6: 配送方法を教えてください。
A6: 速達便 (FEDEX、UPS、DHL、EMS など) または空路および陸路で発送できます。ご注文前にご確認ください。